Pagsukat ng Enzyme Kinetics
Bilang kaunting background, ang mga enzyme ay mga protina na kumikilos bilang mga katalista sa pagbawas ng dami ng enerhiya sa pagsasaaktibo para sa isang reaksyon na mangyari. Ang enerhiya ng pag-activate ay ang enerhiya na kinakailangan upang makakuha ng mga reaksyon "nagsimula" dahil maraming mga reaksyon ay hindi naganap nang napakabilis (o mangyayari sa lahat) kung sila ay maaaring maging thermodynamically.
Ang enzymes catalyze tiyak na mga reaksyon sa isang partikular na site (na kilala bilang ang aktibong site) kung saan ang mga reaktibo ay may tali at reaksyon upang makabuo ng mga produkto. Ang mga substrates ay may mga aktibong site na tiyak sa kanila lamang upang walang iba pang mga sangkap na magkakatiwalaan o mag-react sa parehong site. Tulad ng isang lock at key, ang bawat enzyme ay catalyze lamang ng isang tiyak na reaksyon (na may ilang mga eksepsiyon).
Ang partikular na aktibidad ay ginagamit sa mga paraan ng paghihiwalay ng protina upang ipahiwatig ang porsyento ng paglilinis. Mahalagang malaman ang yunit na ito kapag bumili ng mga enzymes upang ipahiwatig nang eksakto kung gaano karami ang dalisay na enzyme na iyong nakukuha.
Kapag ang pagsukat ng enzyme kinetika (ang rate ng reaksyon ng isang enzyme na may substrate - o ibabaw), ang tiyak na aktibidad ay tinukoy bilang ang halaga ng substrate na enzyme convert (reaksyon catalyzed), kada mg protina sa enzyme paghahanda, sa bawat yunit ng oras.
Ang isang halimbawa ng tiyak na aktibidad ay magiging:
- Ang tiyak na aktibidad ng nakahiwalay na enzyme ay sinukat sa 150 umoles / min / mg protina bago ang paglilinis at 800 umoles / min / mg, pagkatapos ng paglilinis.
Ang tiyak na aktibidad ay isang mahalagang sukatan ng kadalisayan ng enzyme. Ang iba't ibang mga batch ng isang dalisay na enzyme ay dapat magkaroon ng parehong mga halaga at kahit na diluting isang enzyme solusyon maraming beses magkakaroon ng magkaparehong tukoy na halaga ng aktibidad kahit na magkakaroon ng iba't ibang mga halaga ng aktibidad ng enzyme. Ito ay dahil sa pagkalkula ng tiyak na aktibidad, ang numerator (yunit / ml) at denominador (mg / ml) ay pantay na naapektuhan.
Ang partikular na aktibidad ay ibang-iba mula sa aktibidad, ngunit ang pagkalkula ng partikular na aktibidad ay umaasa pa rin sa halaga ng aktibidad. Nangangahulugan ito na ang nakasaad na tukoy na halaga ng aktibidad ay nakasalalay din sa kahulugan ng yunit ng enzyme.
Ang mga batch ng mga enzymes na may mas mababa kaysa sa inaasahang tiyak na halaga ng aktibidad ay maaaring maglaman ng mga molecule ng enzyme na nabago o halo-halong may mga impurities.
Mga Kadahilanan na nakakaapekto sa Aktibidad ng Enzyme
Posible na ang isang enzyme ay maaaring magkaroon ng iba't ibang sinusukat halaga ng aktibidad kapag sinusukat sa iba't ibang mga laboratoryo (samakatuwid nga, ang mga tunay na pagkakaiba sa nasusukat na aktibidad, hindi maliwanag na mga pagkakaiba na dulot ng paggamit ng iba't ibang mga kahulugan sa yunit).
Ang paraan ng pagsasakatuparan ng isang esse (ang pamamaraan ng pagsusuri upang matukoy ang kadalisayan ng mga enzymes) ay makakaimpluwensya sa naiulat na mga halaga ng aktibidad. Halimbawa, ang mga enzyme sa pangkalahatan ay mas aktibo sa pagitan ng temperatura ng 37 degrees Celsius kumpara sa 20 degrees Celsius, kaya kung ang isang esse ay isinasagawa sa 21 degrees Celsius, ang mga halaga ay naiiba mula sa assays na isinasagawa sa isang temperatura ng 32 degrees Celsius (kadalasan , ang mga assay ay isinasagawa sa isang temperatura sa pagitan ng 20-37 degrees Celsius).
Kaya, ang kahulugan ng enzyme yunit ay mas mahusay na ipinahayag bilang 1 yunit (U) ay ang halaga ng enzyme na catalyzes ang reaksyon ng 1 nmol ng substrate bawat minuto sa ilalim ng standard na kondisyon.