Anong Mga Vectors ang Dapat Gawin Ng Mga Gene at Cloning
Sa molecular cloning, ang vector ay isang molecule ng DNA na naglilingkod bilang carrier para sa paglipat o pagpasok ng (mga) banyagang gene sa isa pang cell, kung saan ito ay maaaring replicated at / o ipinahayag. Ang mga bektor ay kabilang sa mga mahahalagang kasangkapan para sa pag-clone ng gene at pinaka-kapaki-pakinabang kung sila ay magkakaroon ng encode ng ilang uri ng marker gene encoding ng isang molecular bioindicator na maaaring masukat sa isang biological na pagtatasa upang matiyak ang kanilang pagpapasok, at pagpapahayag, sa host organismo.
Sa partikular, ang isang cloning vector ay kinuha ng DNA mula sa isang virus, plasmid o mga selula (ng mga mas mataas na organismo) na maipasok sa isang piraso ng banyagang DNA para sa mga layunin ng pag-clone. Dahil ang cloning vector ay maaaring mapanatili nang matatag sa isang organismo, naglalaman din ang vector ng mga tampok na nagbibigay-daan para sa maginhawang pagpasok o pagtanggal ng DNA. Pagkatapos na ma-clone sa isang cloning vector, ang fragment ng DNA ay maaaring maging karagdagang subcloning sa ibang vector na maaaring magamit nang mas tiyak.
Sa ilang mga kaso, ang mga virus ay ginagamit upang mahawa ang bakterya. Ang mga virus na ito ay tinatawag na bacteriophage, o phage, para sa maikli. Ang mga retrovirus ay mahusay na mga vectors para sa pagpapasok ng mga gene sa mga selulang hayop. Ang mga plasmid, na mga pabilog na piraso ng DNA, ay ang mga karaniwang ginagamit na vectors na ginagamit upang ipakilala ang mga banyagang DNA sa mga bakterya na selula. Sila ay madalas na nagdadala ng mga antibiotic resistance genes na maaaring magamit upang subukan para sa pagpapahayag ng plasmid DNA, sa antibyotiko petri plates.
Ang paglilipat ng gene sa mga selula ng halaman ay karaniwang ginagawa gamit ang bacteriumium na Agrobacterium tumefaciens , na nagsisilbing vector at nagpapasok ng malaking plasmid sa host cell. Tanging ang mga selyenteng naglalaman ng cloning vector ay lalago kapag may mga antibiotics.
Ang Mga Pangunahing Uri ng Mga Cloning Vectors
Ang anim na pangunahing uri ng mga vectors ay:
- Plasmid. Circular extrachromosomal DNA na autonomously replicates sa loob ng bacterial cell. Ang mga plasmid ay karaniwang mayroong isang mataas na numero ng kopya, tulad ng pUC19 na may isang kopya ng bilang ng 500-700 na mga kopya sa bawat cell.
- Phage. Ang mga molecular linear DNA na nagmula sa bacteriophage lambda. Maaaring mapalitan ng dayuhang DNA nang hindi nakakaabala sa buhay nito.
- Cosmids. Ang isa pang pabilog na extrachromosomal molekula ng DNA na pinagsasama ang mga tampok ng plasmids at phage.
- Mga Artipisyal na Chromosome ng Bakterya. Batay sa bacterial mini-F plasmids.
- Mga Artipisyal na Chromosome sa lebadura. Ito ay isang artipisyal na kromosomang naglalaman ng mga telomere (hindi kinakalawang na buffer sa mga dulo ng chromosome na pinutol sa panahon ng dibisyon ng cell) na may mga pinagmulan ng pagtitiklop, isang centromere ng lebadura (bahagi ng kromosoma na nag-uugnay sa chromatids ng kapatid o dyad), at isang mapipili na marker para sa pagkakakilanlan sa mga selula ng lebadura.
Human Artificial Chromosome. Ang uri ng vector ay potensyal na kapaki-pakinabang para sa paghahatid ng gene sa mga selula ng tao, at isang tool para sa mga pag-aaral ng pagpapahayag at pagtukoy ng pag-andar ng kromosoma ng tao. Maaari itong magdala ng napakalaking piraso ng DNA.
Ang lahat ng mga engineered vectors ay may pinanggalingan ng pagtitiklop (isang replicator), isang cloning site (na matatagpuan kung saan ang pagpasok ng mga banyagang DNA ay hindi rin nakagambala sa pagtitiklop o pag-activate ng mga mahahalagang marker), at isang mapipiling marker (karaniwang isang gene na nagbibigay ng pagtutol sa isang antibyotiko.)