Paano tumayo ang mga endonuceleases na ito
Magkano ang nalalaman mo tungkol sa mga enzymes ng paghihigpit? Kumuha ng isang mas mahusay na pag-unawa sa kung ano ang ginagawa nila at kung bakit ang mga ito ay mahalaga, sa pagsusuri na ito.
Pagtukoy sa Mga Enzymes ng Restriction
Ang mga endonucleases sa pagbabawal ay isang klase ng enzyme na nagtatanggal ng mga molecule ng DNA. Kinikilala ng bawat enzyme ang isang natatanging pagkakasunud-sunod ng mga nucleotide sa DNA strand. Ang ganitong mga pagkakasunud-sunod ay kadalasang mga 4 hanggang 6 base-pares ang haba. Ang mga pagkakasunud-sunod ay palindromic sa ang komplimentaryong DNA strand ay may parehong pagkakasunud-sunod lamang sa reverse direksyon.
Sa ibang salita, ang parehong mga hibla ng DNA ay pinutol sa parehong lokasyon.
Kung Saan Natagpuan ang mga Enzymes
Ang mga enzymes sa pagbabawal ay matatagpuan sa maraming iba't ibang mga strains ng bakterya kung saan ang kanilang biological na papel ay upang lumahok sa pagtatanggol sa cell. Ang mga enzyme na ito ay "paghigpitan" ang mga banyagang (hal. Viral) DNA na pumapasok sa cell, sa pamamagitan ng pagsira nito. Ang host cell ay may isang sistemang pagbabago sa pagbabawal na nagtatanggal ng sarili nitong DNA sa mga partikular na site para sa kani-kanilang mga enzymes sa paghihigpit, sa gayon pinoprotektahan ito mula sa cleavage. Higit sa 800 kilalang enzymes ang natuklasan na makilala ang higit sa 100 iba't ibang mga sequence ng nucleotide.
Gamitin sa Biotechnology
Ang mga enzymes sa pagbabawal ay ginagamit sa biotechnology upang i-cut ang DNA sa mas maliliit na strands upang pag-aralan ang mga pagkakaiba sa haba ng fragment sa mga indibidwal (Restriction Fragment Length Polymorphism - RFLP). Ginagamit din ang mga ito para sa pag-clone ng gene.
Ang mga pamamaraan ng RFLP ay ginamit upang matukoy na ang mga indibidwal o grupo ng mga indibidwal ay may mga natatanging pagkakaiba sa mga pagkakasunud-sunod ng gene at mga pattern ng pagbubukod ng mga cleavage sa ilang mga lugar ng genome.
Ang kaalaman sa mga natatanging lugar na ito ay ang batayan para sa fingerprint ng DNA . Ang bawat isa sa mga pamamaraan ay depende sa paggamit ng agarose gel electrophoresis para sa paghihiwalay ng mga fragment ng DNA. Ang TBE buffer, na binubuo ng Tris base, boric acid, at EDTA, ay karaniwang ginagamit para sa agarose gel electrophoresis para masuri ang mga produkto ng DNA.
Mga Uri ng Mga Enzymes sa Paghihigpit
May tatlong magkakaibang uri ng mga enzymes sa paghihigpit. Ang Type I ay nagpuputol ng DNA sa random na mga lokasyon hanggang sa 1000 o higit pang base-pairs mula sa site ng pagkilala. Ang Uri III ay nagbawas sa humigit-kumulang 25 base-pairs mula sa site. Mga Uri ng I at III ay nangangailangan ng ATP at maaaring malaki enzymes na may maraming mga sub-unit. Uri II enzymes, na kung saan ay nakararami ginagamit sa biotechnology, i-cut DNA sa loob ng kinikilalang pagkakasunod-sunod nang walang pangangailangan para sa ATP at mas maliit at mas simple.
Ang mga uri ng enzymes na paghihigpit sa II ay pinangalanan ayon sa bacterial species kung saan sila ay nakahiwalay. Halimbawa, ang enzyme EcoRI ay nakahiwalay sa E. coli . Karamihan ng publiko ay pamilyar sa paglaganap ng E. coli sa pagkain.
Ang mga uri ng enzymes sa paghihigpit ng II ay maaaring makabuo ng dalawang magkakaibang uri ng pagbawas depende sa kung pinutol nila ang parehong mga hibla sa gitna ng pagkakasunud-sunod ng pagkilala o ang bawat strand na mas malapit sa isang dulo ng pagkakasunud-sunod ng pagkilala.
Ang dating hiwa ay bubuo ng "mga dulo ng mapurol" na walang mga overhang na nucleotide. Ang huli ay bumubuo ng "sticky" o "cohesive" na dulo dahil ang bawat isa na nagreresulta ng fragment ng DNA ay may isang overhang na papuri sa iba pang mga fragment. Ang parehong ay kapaki-pakinabang sa molecular genetics para sa paggawa ng recombinant DNA at mga protina.
Ang form na ito ng DNA ay nakasalalay dahil ito ay ginawa ng ligation (bonding magkasama) ng dalawa o higit pang iba't ibang mga hibla na hindi orihinal na nauugnay nang magkasama.