Tinutukoy din bilang RFLP Analysis, ang pamamaraan ay nagsasamantala sa mga polymorphism sa mga genetic code ng indibidwal na tao. Kahit na ang lahat ng mga miyembro ng isang species ay may mahalagang parehong genetic makeup, ang mga bahagyang pagkakaiba na ito ay para sa mga pagkakaiba-iba sa phenotype, tulad ng hitsura o metabolismo, sa pagitan ng mga indibidwal.
RFLP: Pagsusuri ng Diskarte at Mga Aplikasyon
Ang diskarte sa pagtatasa ng RFLP ay nagsasangkot ng pagputol ng isang partikular na rehiyon ng DNA na may kilalang pagkakaiba-iba, na may mga enzymes na paghihigpit, pagkatapos ay ibinabahagi ang mga fragment ng DNA sa pamamagitan ng elektrophoresis ng agarose gel at tinutukoy ang bilang ng mga fragment at kamag-anak na sukat.
Ang isang paghihigpit na enzyme ay isang enzyme, isang molecule ng protina, na nagbabawas ng DNA sa mga site ng pagbabawal. Sa kakanyahan, ang sample ng DNA ay nasira at hinuhuli ng mga enzymes sa paghihigpit. Ang mga resultang fragment ay pinaghihiwalay ayon sa kanilang mga haba at ang pattern ng mga laki ng fragment ay naiiba para sa bawat indibidwal na nasubok.
Ang buong proseso ng RFLP ay nangangailangan ng pag-label ng probe, pagkapira ng DNA, electrophoresis, blotting, hybridization, paghuhugas, at autoradiography. Nakikita ang nakita na RFLP gamit ang X-ray film sa isang autoradiography, kung saan ang mga fragment ng DNA ay maaaring matingnan at masuri pagkatapos na magkahiwalay sila sa isa't isa sa pamamagitan ng electrophoresis.
Ang ilan sa mga aplikasyon para sa pagtatasa ng RFLP ay kinabibilangan ng:
- DNA fingerprinting . Ang mga siyentipiko ng forensic ay maaaring gumamit ng pagsusuri ng RFLP upang makilala ang mga suspect batay sa mga halimbawa ng ebidensiya na nakolekta sa mga eksena ng mga krimen.
- Paternity. Ginagamit din ang RFLP sa pagpapasiya ng pagka-ama o para sa pagsunod ng mga ninuno.
- Pagkakaiba-iba ng genetiko. Ang pamamaraan ay maaaring gamitin sa pag-aaral ng ebolusyon at paglilipat ng mga hayop, pag-aaral ng mga pattern ng pag-aanak sa mga populasyon ng hayop at sa pagtuklas at pagsusuri ng ilang mga sakit.
Ang pamamaraan ng paggamit ng RFLP detection ng pagkakaiba-iba sa mga genome ay isang mahalagang tool sa pag-map ng genome at pagtatasa ng genetic disease. Kung ang lokasyon ng isang partikular na sakit na gene ay hinahanap sa isang tiyak na kromosoma, pagkatapos ay pag-aralan ng mga mananaliksik ang DNA ng mga miyembro ng isang pamilya na may sakit, pagkatapos ay hanapin ang katulad na mga pattern ng mana sa RFLP alleles.
Kapag ang isang gene ng sakit ay naisalokal, ang pagsasagawa ng pagtatasa ng RFLP sa iba pang mga miyembro ng pamilya ay maaaring magbunyag ng carrier ng mutant genes o magsenyas ng pangkalahatang panganib sa sakit. Mahalagang tandaan na ang pamamaraan ng RFLP ay hindi malawak na ginagamit ngayon na ang mas bago, mas mahusay na mga diskarte ay ginagamit para sa pagtatasa ng DNA sa forensic science at maraming iba pang mga larangan.
Negatibong Aspeto ng Pagsusuri
Sa kasamaang palad, ang pamamaraan ng pagtatasa ng RFLP ay nakakapagod at mabagal. Bukod sa nangangailangan ng isang malaking halaga ng sample DNA - ang sample ay kadalasang kailangang maging tungkol sa laki ng isang isang-kapat, na kung saan ay medyo malaki para sa mga sample ng DNA - ang proseso, mula sa pagsisiyasat labeling sa washing at autoradiography, ay maaaring tumagal ng hanggang sa isang buong buwan upang makumpleto.
Ang mga resulta mula sa Human Genome Project ay halos pinalitan ang pangangailangan para sa RFLP. Ang proyektong pinapayagan sa pagtukoy sa buong pagkakasunud-sunod ng DNA na matatagpuan sa mga selula ng tao, ang genome ng tao, at para sa pagkilala sa lahat ng mga genes sa genome ng tao.